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登革熱病毒捕獲法IgG抗體檢測(cè)試劑盒

Panbio Dengue IgG Capture ELISA

產(chǎn)品目錄號(hào)01PE10

預(yù)期用途

Panbio Dengue IgG Capture ELISA用于推斷性定性檢測(cè)登革熱病毒（1-4血清型）繼發(fā)性感染患者的IgG抗體升高，輔助臨床實(shí)驗(yàn)室診斷出現(xiàn)登革熱病毒感染臨床癥狀的患者，而且應(yīng)該與Panbio Dengue IgM Capture ELISA 和Dengue Early ELISA聯(lián)用。Dengue Early ELISA也可檢測(cè)原發(fā)性登革熱病毒感染。Panbio Dengue IgG Capture ELISA早可在疾病發(fā)作后3天檢測(cè)到提示繼發(fā)性登革熱感染的高IgG, 水平。然而，準(zhǔn)確診斷繼發(fā)性感染的峰值檢測(cè)窗口是在疾病發(fā)作后6-15天。陽性結(jié)果是推斷出來的，必須經(jīng)過病毒分離培養(yǎng)、配對(duì)血清分析、免疫組織化學(xué)抗原檢測(cè)或病毒核酸檢測(cè)來確認(rèn)登革熱病毒感染。

概述

登革熱病毒是黃病毒屬，主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。世界上一半以上的人口居住于具有登革熱潛在傳播風(fēng)險(xiǎn)的地區(qū)，登革熱是導(dǎo)致人類發(fā)病和死亡嚴(yán)峻的蟲媒病毒疾病¹。登革熱病毒有4種不同但抗原相關(guān)的血清型，通過雌蚊（主要是埃及伊蚊、白紋伊蚊傳播和波利尼西亞斑蚊）傳播。

登革熱病毒感染的臨床表現(xiàn)各不相同，從亞臨床表現(xiàn)到致命。依據(jù)嚴(yán)重程度，該疾病被分為以下等級(jí)：非特異性發(fā)熱疾病，典型登革熱，登革出血熱（DHF）（1級(jí)和2級(jí)），和登革休克綜合征（DSS）（3級(jí)和4級(jí)）¹。典型登革熱的特征是突然發(fā)熱并至少伴隨以下2種癥狀：頭痛，眼眶后疼痛，肌痛，關(guān)節(jié)痛，皮疹，出血表現(xiàn)，和白血球減少癥²。雙相發(fā)熱病程常見失眠和厭食，失去味覺或口苦。DHF和DSS是嚴(yán)重的潛在致命性并發(fā)癥，通常與感染第二種血清型有關(guān)³。

在地方性流行登革熱感染的國(guó)家，大部分成年患者會(huì)出現(xiàn)繼發(fā)性登革熱感染⁴。利用ELISA方法檢測(cè)登革熱病毒的IgG抗體特異性升高是鑒別繼發(fā)性登革熱感染非常重要的診斷方法。繼發(fā)性感染患者并發(fā)癥的發(fā)生幾率較高^5,6。傳統(tǒng)上，血凝抑制試驗(yàn)（HAI）滴度被用于劃分原發(fā)性或繼發(fā)性感染。當(dāng)前的界定方法是采用及時(shí)分離至少7天的配對(duì)血清標(biāo)本檢測(cè)，急性標(biāo)本的HAI滴度> 1:1280被認(rèn)為患者感染了繼發(fā)性黃病毒⁷。

Panbio Dengue IgG Capture ELISA是除HAI檢測(cè)之外另一種可對(duì)繼發(fā)性登革熱感染的血清學(xué)進(jìn)行診斷的方法。

如下所示，繼發(fā)性登革熱病毒感染的特征表現(xiàn)為高IgG ,水平，同時(shí)可能伴隨IgM水平升高⁸。Panbio Dengue IgG Capture ELISA用于檢測(cè)登革熱感染的IgG抗體水平相對(duì)于閾值特異性升高。該試驗(yàn)不用于檢測(cè)既往感染引起的低水平IgG抗體，這種情況通常見于地方性流行區(qū)的較多人群。因此，高IgG ,水平（> 22 Panbio單位）提示繼發(fā)性登革熱病毒感染。

檢測(cè)原理

血清中存在的登革熱病毒IgG抗體，與微孔測(cè)試條（測(cè)定板）上聚苯乙烯表面包被的抗人IgG抗體結(jié)合。用抗原稀釋劑將濃縮的重組登革熱1-4型抗原溶液稀釋到正確的工作容積。用昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生抗原，用特異性單克隆抗體純化抗原。在稀釋后的抗原中添加等體積的辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記單克隆抗體（MAb），形成抗原MAb復(fù)合物。清洗測(cè)定板上的剩余血清，將抗原MAb復(fù)合物添加到測(cè)定板中。然后這些抗原MAb復(fù)合物與血清登革熱特異性IgG抗體結(jié)合。在培養(yǎng)完成后清洗微孔，再添加無色的底物系統(tǒng) - 四甲基聯(lián)苯胺/過氧化氫（TMB顯色液）。底物被HRP（如存在）水解后，顯色液變藍(lán)。用酸終止反應(yīng)后，TMB變黃。顯色表示測(cè)試樣本中存在抗登革熱IgG抗體。

提供的材料

• 抗人IgG包被微孔 - （測(cè)定板）
  （12x8孔）。即用型。未使用的微孔應(yīng)該立即重新密封并儲(chǔ)存于干燥環(huán)境中。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 登革熱1-4型抗原（重組） - 1瓶，無色瓶蓋，包含150μL（紅色）濃縮的1型、2型、3型和4型登革熱病毒抗原。未使用的稀釋抗原必須丟棄。濃縮抗原在有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 清洗緩沖液（20倍） - 1瓶，60mL 20倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水（pH 7.2 – 7.6），含吐溫 20和防腐劑（0.1% Proclin™）。低溫可能結(jié)晶。若去除結(jié)晶，可在37℃孵育液體至澄清。混合均勻。用19體積的蒸餾水稀釋1體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在2-25℃儲(chǔ)存一周。
• 樣本稀釋劑 – 2瓶， 50 mL（粉色）。即用型。Tris緩沖生理鹽水（pH 7.2 – 7.6），含防腐劑（0.1% Proclin™）和添加劑。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 抗原稀釋劑 – 1瓶，50mL（無色）。即用型。磷酸鹽緩沖液，含防腐劑（0.1% Proclin™和0.005%慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• HRP標(biāo)記單克隆抗體示蹤劑 – 1瓶，7mL（綠色）。即用型。辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記單克隆抗體示蹤劑，含防腐劑（0.1% Proclin™）和蛋白穩(wěn)定劑。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• TMB顯色液（TMB） - 1瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯(lián)苯胺和過氧化氫的混合物，存放于枸櫞酸鹽緩沖液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 反應(yīng)控制品 – 1瓶，紅色瓶蓋，200μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 校準(zhǔn)品 – 1瓶，黃色瓶蓋，850μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 陰性質(zhì)控品 – 1瓶，綠色瓶蓋，200μL人血清（含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素）。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8℃可保持穩(wěn)定。
• 終止液 – 1瓶，紅色瓶蓋，15mL。即用型。1M磷酸。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-25℃可保持穩(wěn)定。

Proclin™ 300是Rohm 和Haas公司的注冊(cè)商標(biāo)。

需要但未提供的材料

• 精確、可調(diào)節(jié)的微量移液器，含一次性吸液頭（5-1000 μL容積）
• 去離子水
• 標(biāo)板清洗系統(tǒng)
• 酶標(biāo)儀，含450nm濾波器
• 計(jì)時(shí)器
• 刻度量筒
• 燒瓶
• 試管或微滴定板，用于稀釋血清

注意事項(xiàng)

用于體外診斷

• 在制備質(zhì)控品的過程中使用的所有人源性材料已經(jīng)過人類免疫缺陷病毒1/2（HIV 1 /2）抗體、丙肝（HCV）和乙肝表面抗原的檢測(cè)，結(jié)果為陰性。但是，任何測(cè)試方法都不能*確信，且所有人源性質(zhì)控品和抗原都應(yīng)按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預(yù)防中心以及美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院建議將潛傳染原按照生物安全二級(jí)處理。
• 該測(cè)試只能使用血清執(zhí)行。尚未建立使用全血、血漿或其它標(biāo)本基質(zhì)的方法。
• 不可使用黃疸或脂血癥血清，以及出現(xiàn)溶血或微生物生長(zhǎng)的血清。
• 不可加熱，否則血清將失去活性。
• 在開始檢測(cè)前所有試劑必須平衡至室溫（20-25℃）。檢測(cè)受溫度變化的影響。微孔板在達(dá)到室溫（20-25℃）之前不可從密封袋中取出。
• 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉(zhuǎn)移試劑可能導(dǎo)致污染。
• 未使用的微孔應(yīng)該立即重新密封并儲(chǔ)存于干燥環(huán)境中，否則將產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。
• 底物系統(tǒng)：

• 由于TMB易受金屬離子的污染，所以底物系統(tǒng)不能與金屬表面接觸。
• 避免長(zhǎng)時(shí)間陽光直射。
• 有些清潔劑可干擾TMB的性能。
• TMB可能呈現(xiàn)淡藍(lán)色，這不影響底物的活性或測(cè)定結(jié)果。

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